Deteksi Makanan Ayam Salmonella : VIDAS vs API 20E vs SN 0170-92
Kolin Klorida untuk Akar & Ekspansi Umbi
Oktober 9, 2026
1. Ruang Lingkup Penelitian dan Tujuan Analisis
Penelitian ini menggunakan tiga metode deteksi berbeda – VIDAS, API 20E, dan SN 0170-92 — untuk memeriksa sampel buta yang disediakan dalam program uji kemahiran CNCA untuk bakteri patogen umum dalam tepung ayam. Kekuatan dan kelemahan masing-masing metode pendeteksian Salmonella diringkas dan dibandingkan. Salmonella ditularkan terutama melalui saluran pencernaan hewan dan dapat menyebabkan demam tifoid dan paratifoid (secara kolektif dikenal sebagai demam enterik), keracunan makanan, keracunan darah, dan enteritis kronis. karena Salmonella tersebar luas di alam dan menimbulkan ancaman besar bagi kesehatan manusia, peraturan kebersihan negara-negara di seluruh dunia umumnya menetapkan hal itu Salmonella tidak boleh terdeteksi dalam tepung ayam.
Saat ini, metode deteksi yang umum digunakan mencakup metode uji biokimia konvensional seperti metode standar nasional (GB) dan standar industri pemeriksaan komoditas impor dan ekspor (hal); metode VIDAS, yang mengandalkan teknologi imunofluoresensi terkait-enzim; dan metode biologi molekuler seperti PCR. Setiap metode memiliki kelebihan dan kekurangannya masing-masing. di 2006, laboratorium ini berpartisipasi dalam uji profisiensi CNCA “Bakteri Patogen Umum dalam Tepung Ayam (CNCA-06-02)” dan mendeteksi satu Salmonella isolasi menggunakan tiga metode berbeda: HIDUP, hal 0170-92, dan API 20E. Laporan ini mendokumentasikan pekerjaan tersebut secara lengkap.
Berkas teknis disusun sebagai referensi data terstruktur dan bukan artikel naratif. Ia menggunakan tabel standar dengan kepadatan tinggi untuk menyajikan konfigurasi instrumen, sumber reagen, langkah-langkah prosedural, profil reaksi biokimia, perincian konsumsi waktu, penilaian akurasi, dan panduan pemilihan metode. Format ini dirancang untuk mendukung pengindeksan cepat, ekstraksi cuplikan unggulan, dan penggunaan bangku laboratorium langsung.
2. Sekilas tentang Indikator Kinerja Utama
Parameter judul gabungan yang diambil dari program deteksi komparatif.
3. Sumber Instrumentasi dan Reagen
Masing-masing dari tiga rute deteksi bergantung pada instrumen dan ekosistem reagen yang berbeda. Tabel di bawah mendokumentasikan produsen dan pemasok untuk setiap bahan habis pakai yang penting, sehingga metode tersebut dapat direproduksi tanpa ambiguitas.
4. Dasar Pengujian dan Standar Referensi
Metode SN mengikuti SN 0170-92. Prosedur VIDAS dan API 20E dijalankan sesuai dengan protokol operasi yang ditentukan oleh pabrikan. Tabel di bawah menghubungkan masing-masing metode dengan dokumen yang mengaturnya dan menentukan tingkat kebebasan prosedural yang diperbolehkan.
| metode | Dokumen yang Mengatur | Pengendalian Prosedur | Status Standar |
|---|---|---|---|
| hal 0170-92 | hal 0170-92, ekspor tepung ayam Salmonella Metode inspeksi | Diresepkan secara penuh sesuai standar | Metode referensi industri |
| HIDUP | Prosedur yang divalidasi oleh pabrikan | Digerakkan oleh instrumen, dikendalikan oleh perangkat lunak | Metode skrining cepat yang diakui FDA |
| API 20E | Prosedur yang divalidasi oleh pabrikan | Inokulasi strip manual, pembacaan perangkat lunak | Miniatur metode biokimia konvensional |
| Uji kapasitas | CNCA-06-02 skema uji kemahiran | Sampel buta didistribusikan oleh CNCA | Perbandingan antar laboratorium |
5. hal 0170-92 Alur Kerja Deteksi
SN 0170-92 Prosedurnya adalah yang paling komprehensif dari ketiga rute tersebut. Ini berasal dari pra-pengayaan melalui pengayaan selektif, isolasi pada media diferensial, tes skrining, konfirmasi biokimia, dan pengetikan serologis. Setiap tahap dipisahkan dalam waktu dan memerlukan seperangkat media dan reagen yang berbeda.
| Panggung | Operasi | Media / reagen | kondisi | Lamanya |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Pra-pengayaan | Air pepton yang disangga (BP) | 37 ° C | 24 H |
| 2 | Pengayaan selektif | kaldu hijau cemerlang tetrationat (TTB) | 42 ° C | 6–8 jam |
| 3 | isolasi | Agar bismut sulfit; agar-agar DCLS | 37 ° C | 24 ± 2 H |
| 4 | tes skrining | Besi gula rangkap tiga (TSI) agar-agar | 37 ° C | 24 H |
| 5 | konfirmasi biokimia | Lisin dekarboksilase, Urease, Wakil Presiden, Taman industri, indol, malonat, dulsitol | 37 ° C | 24–48 jam |
| 6 | Konfirmasi serologis | Antiserum faktor “O”. | Geser aglutinasi pada suhu kamar | menit |
6. Alur Kerja Deteksi VIDAS
Rute VIDAS memampatkan rantai deteksi menjadi empat langkah utama: Pra-pengayaan, Pengayaan selektif, pasca pengayaan dalam kaldu M, dan immunoassay otomatis. Tidak diperlukan pelat isolasi dan strip biokimia manual, yang merupakan alasan utama singkatnya waktu yang telah berlalu. Sebuah 1 mL porsi kaldu M diberi perlakuan panas pada 100 °C untuk 15 Min, Dan 0.5 mL kultur yang telah diolah dimasukkan ke dalam strip reagen untuk pembacaan instrumen.
| Melangkah | Operasi | SEDANG / pengobatan | kondisi | Lamanya |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Pra-pengayaan | 25 g sampel masuk 225 mL air pepton yang disangga | 37 ° C | 24 H |
| 2 | Pengayaan selektif | 10 mL ke dalam 100 mL TTB | 42 ° C | 6–8 jam |
| 3 | Pasca pengayaan | 1 mL ke dalam 10 mL M kaldu | 42 ° C | 18 H |
| 4 | Perawatan sampel | 1 mL M kaldu dipanaskan dalam penangas air | 100 ° C, 15 Min | 15 Min |
| 5 | Uji instrumen | 0.5 mL ke dalam strip reagen VIDAS SLM | Mini-LIFE otomatis | ≈1 jam |
| 6 | Keluaran hasil | Laporan tercetak dari instrumen | Interpretasi otomatis | Segera |
7. Alur Kerja Deteksi API 20E
Rute API 20E mempertahankan urutan pengayaan dan isolasi konvensional namun menggantikan masing-masing tabung biokimia dengan strip reagen 20 sumur tunggal. Koloni yang mencurigakan diambil dari pelat isolasi, tergantung, dan diinokulasikan ke dalam tabung mikro. Setelah inkubasi dan penambahan reagen pembantu, pola positif/negatif diubah menjadi profil numerik dan diserahkan ke perangkat lunak API LAB untuk identifikasi.
| Melangkah | Operasi | SEDANG / reagen | kondisi | Lamanya |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Pra-pengayaan dan pengayaan selektif | BP diikuti oleh TTB | 37 °C lalu 42 ° C | 24 H + 6–8 jam |
| 2 | Budaya isolasi | Agar bismut sulfit dan agar DCLS | 37 ° C | 24 ± 2 H |
| 3 | Penangguhan koloni | Koloni tunggal yang mencurigakan | garam steril | Persiapan |
| 4 | Inokulasi strip API 20E | 20 tabung mikro pada satu strip | 37 ° C | 24 ± 2 H |
| 5 | Penambahan dan pembacaan reagen | reagen tambahan | Interpretasi warna manual | menit |
| 6 | Analisis perangkat lunak API LAB | Profil numerik | Pencocokan basis data | Segera |
8. Hasil Deteksi Komparatif
Ketiga metode tersebut memberikan hasil yang positif Salmonella hasil untuk sampel buta. Perbedaannya terletak pada resolusi taksonomi yang dicapai dan bukti pendukung yang diperlukan untuk mencapai kesimpulan tersebut. hal 0170-92 dan VIDAS mengidentifikasi organisme hingga tingkat spesies, sementara API 20E juga menyelesaikan serotipe sebagai Salmonella Paratyphi A dengan %ID dari 99.5 dan nilai T sebesar 1.
9. Profil Reaksi Biokimia API 20E
Sampel diinokulasikan ke dalam 20 tabung mikro dari strip API 20E. Tabel di bawah mencatat hasil positif yang diamati (+) atau negatif (-) reaksi untuk setiap pengujian. Profil ini adalah data mentah yang digunakan oleh perangkat lunak API LAB untuk menghitung identifikasi.
| ONPG | ADH | LDC | ODC | CIT | H2S | URE | TDA | IND | Wakil Presiden |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| - | - | - | + | - | - | - | - | - | - |
| GEL | Glu | PRIA | TIDAK | SOR | RHA | KANTUNG | MEL | AMI | KAMI BELI | SAPI |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| - | + | + | - | + | + | - | + | - | + | - |
Keluaran perangkat lunak: API LAB mengidentifikasi profil tersebut sebagai Salmonella Paratifi A, dengan %ID = 99.5 dan nilai T = 1, dinilai sebagai identifikasi yang sangat baik.
10. Perbandingan Akurasi dan Resolusi Taksonomi
hal 0170-92 dan VIDAS keduanya mengembalikan a Salmonella hasil positif pada tingkat spesies. API 20E kembali Salmonella Paratifi A, mengidentifikasi organisme menjadi serotipe. Tabel berikut membandingkan resolusinya, rantai bukti, dan beban konfirmasi masing-masing metode.
| Kriteria | hal 0170-92 | HIDUP | API 20E |
|---|---|---|---|
| Panggilan terakhir | Salmonella Positif | Salmonella Positif | Salmonella Paratifi A |
| Kedalaman taksonomi | Spesies | Spesies (Penyaringan) | serotipe |
| Keyakinan identifikasi | tinggi (metode referensi) | Tinggi untuk layar | %PENGENAL 99.5; t = 1 |
| Bukti biokimia | Beberapa tabung individu | Tidak ada (imunologis) | 20 reaksi konsolidasi |
| Bukti serologis | iya nih (antiserum "O".) | Tidak | Tidak (inferensi perangkat lunak) |
| Beban konfirmasi | Mandiri | Positif memerlukan konfirmasi konvensional | Mandiri |
| Kedudukan peraturan | Metode referensi untuk perselisihan | Skrining yang diakui FDA | Miniatur konvensional |
11. Rincian Konsumsi Waktu
Total waktu yang berlalu adalah parameter operasional yang menentukan ketika memilih metode deteksi. hal 0170-92 membutuhkan sekitar 100 H, API 20E kira-kira 73 H, dan VIDAS kira-kira 49 H 45 Min. Ketika langkah pengayaan umum, yang mengkonsumsi secara kasar 48 h dalam ketiga metode, dikecualikan, perbedaannya menjadi semakin nyata: hal 0170-92 membutuhkan tentang 73 H, API 20E tentang 49 H, dan VIDAS hanya tentang 1 H (atau tentang 19 h jika langkah pasca pengayaan disertakan).
12. Perbandingan Langkah Prosedural
Ketiga metode tersebut memiliki urutan pengayaan awal yang sama namun berbeda tajam setelahnya. hal 0170-92 berlangsung melalui budaya isolasi, tes skrining, tes biokimia, dan pengujian serologis. API 20E dihasilkan melalui budaya isolasi, strip reagen API 20E, dan analisis perangkat lunak API LAB. VIDAS hanya membutuhkan pengayaan, perlakuan panas 15 menit, dan pemuatan instrumen.
| Tahap Proses | hal 0170-92 | API 20E | HIDUP |
|---|---|---|---|
| budaya pengayaan | ✓ | ✓ | ✓ |
| Budaya isolasi | ✓ | ✓ | - - |
| tes skrining | ✓ | - - | - - |
| tes biokimia | ✓ (Tabung individu) | ✓ (20-mengupas dengan baik) | - - |
| Tes serologis | ✓ | - - | - - |
| Pembacaan instrumen | - - | - - | ✓ (mini-HIDUP) |
| Analisis perangkat lunak | - - | ✓ (LAB API) | ✓ (di atas kapal) |
13. Perbandingan Prinsip Teknologi yang Mendasari
SN 0170-92 Metode ini bergantung pada ekspresi fenotipik organisme dalam media kultur dan pada aglutinasi antigen-antibodi. API 20E juga bergantung pada fenotip, tetapi memperkecil reaksi biokimia dan mendelegasikan interpretasi ke database. VIDAS menggunakan uji fluoresen terkait-enzim (SEBELAS) di mana senyawa fluoresen yang terikat pada antibodi monoklonal yang sangat spesifik bereaksi dengannya Salmonella antigen; zat fluoresen yang dihasilkan terdeteksi oleh instrumen, memungkinkan skrining cepat.
| metode | Prinsip Deteksi | Sasaran Molekuler | Mode Pembacaan |
|---|---|---|---|
| hal 0170-92 | Budaya konvensional, Reaksi Biokimia, seroaglutinasi | Enzim metabolisme dan antigen O | Warna visual / aglutinasi |
| API 20E | Reaksi biokimia mini dalam satu strip | 20 enzim / jalur fermentasi | Perubahan warna visual ditambah database perangkat lunak |
| HIDUP | Uji fluoresen terkait enzim (SEBELAS) | Salmonella antigen | Sinyal fluoresensi instrumen |
| Tingkat otomatisasi | petunjuk | Inokulasi manual, interpretasi otomatis | Pengujian sepenuhnya otomatis |
| Pengakuan peraturan | Metode referensi yang diterima secara internasional | Metode konvensional banyak digunakan | Layar cepat yang diakui FDA |
14. Kelebihan dan Kekurangan Setiap Metode
Masing-masing dari ketiga metode tersebut menempati posisi berbeda pada kurva trade-off antar kecepatan, Biaya, resolusi, dan penerimaan peraturan. Tabel berikut merangkum kekuatan dan keterbatasan yang diamati dalam studi perbandingan ini.
15. Panduan Pemilihan Metode berdasarkan Skenario Aplikasi
Tidak ada satu metode pun yang optimal untuk setiap konteks laboratorium. Matriks pemilihan di bawah ini memetakan ketiga metode tersebut ke dalam skenario operasional umum, sehingga laboratorium dapat memilih rute yang paling tepat sesuai dengan throughputnya, anggaran, dan lingkungan peraturan.
| Skenario | Metode yang Direkomendasikan | Alasan |
|---|---|---|
| Penyaringan throughput tinggi | HIDUP | Perputaran terpendek, pembacaan otomatis |
| Diperlukan identifikasi tingkat serotipe | API 20E | Pengetikan langsung dengan %ID 99.5 |
| Sengketa peraturan atau pengujian konfirmasi | hal 0170-92 | Metode referensi yang diakui secara internasional |
| Anggaran peralatan terbatas | hal 0170-92 | Tidak diperlukan instrumen mahal |
| Konfirmasi positif cepat dari layar VIDAS | API 20E atau SN 0170-92 | Konfirmasi konvensional atas hasil dugaan |
| Kecepatan dan resolusi seimbang | API 20E | Waktu menengah dengan kedalaman taksonomi tinggi |
16. Tabel Ringkasan Parameter Kritis
Tabel di bawah ini menggabungkan setiap parameter kuantitatif yang dilaporkan dalam penelitian ke dalam satu referensi pencarian. Hal ini dimaksudkan untuk dimasukkan langsung ke dalam prosedur operasi standar laboratorium dan berkas validasi metode.
| PARAMETER | hal 0170-92 | API 20E | HIDUP |
|---|---|---|---|
| Ukuran sampel | 25 g | 25 g | 25 g |
| Volume pra-pengayaan | 225 ml TD | 225 ml TD | 225 ml TD |
| Pengayaan selektif | 10 mL ke dalam 100 mL TTB | 10 mL ke dalam 100 mL TTB | 10 mL ke dalam 100 mL TTB |
| Pasca pengayaan | - - | - - | 1 mL ke dalam 10 mL M kaldu |
| Perawatan panas | - - | - - | 100 ° C, 15 Min |
| media isolasi | Bismut sulfit; DCLS | Bismut sulfit; DCLS | Tidak ada |
| Platform biokimia | Tabung individu | jalur API 20E | Tidak ada |
| Serologi | antiserum "O". | Tidak diperlukan | Tidak diperlukan |
| Instrumen | Tidak ada | perangkat lunak API LAB | mini-HIDUP |
| Total waktu | ≈100 jam | ≈73 jam | ≈49 jam 45 Min |
| Tingkat identifikasi | Spesies | serotipe | Spesies (layar) |
17. Sintesis Diskusi
Standar industri inspeksi dan karantina impor dan ekspor Tiongkok saat ini Salmonella (hal 0170-92) bergantung pada reaksi biokimia dan reaksi serologis untuk mengidentifikasi dan mengkonfirmasi Salmonella. Ini memiliki siklus deteksi yang panjang, prosedur uji biokimia yang kompleks, dan membutuhkan sejumlah besar reagen. API 20E pada dasarnya melanjutkan metode tradisional tetapi mencapai miniaturisasi dan konsolidasi uji biokimia: 20 reaksi biokimia terkonsentrasi pada satu strip, dan semua tes biokimia diselesaikan dalam satu operasi. VIDAS mengadopsi teknologi imunofluoresensi terkait-enzim modern (SEBELAS). Ia menggunakan senyawa fluoresen yang terikat pada antibodi; ketika antibodi monoklonal berlabel fluoresen yang sangat spesifik bereaksi dengan Salmonella antigen, zat fluoresen yang dihasilkan dapat dideteksi oleh instrumen, sehingga mencapai skrining cepat untuk Salmonella. Metode VIDAS telah mendapat pengakuan FDA AS.
18. Cuplikan Data Terstruktur — Referensi Spesifikasi Lengkap
| Identifikasi studi | CNCA-06-02 tes kecakapan, MAKANAN AYAM, bakteri patogen umum |
| Metode dibandingkan | HIDUP, API 20E, hal 0170-92 |
| Hasil sampel | Satu yang positif Salmonella memisahkan, diketik sebagai s. Paratifi A |
| hal 0170-92 Waktu | Total ≈100 jam; ≈73 jam tidak termasuk pengayaan |
| Waktu API 20E | Total ≈73 jam; ≈49 jam tidak termasuk pengayaan |
| Tim HIDUP | ≈49 jam 45 total saya; ≈1 jam tidak termasuk pengayaan (≈19 jam dengan pasca pengayaan) |
| Identifikasi API 20E | %tanda pengenal = 99.5, Nilai-T = 1, identifikasi yang sangat baik |
| Batasan VIDAS utama | Melaporkan positif palsu; hasil positif memerlukan konfirmasi konvensional |
| Kunci SN 0170-92 kekuatan | Metode referensi yang diterima secara internasional; dasar penyelesaian perselisihan |
| Kekuatan utama API 20E | Strip biokimia 20 reaksi terkonsolidasi; identifikasi langsung ke serotipe |
19. Rekomendasi Akhir dari Studi Banding
Temuan studi perbandingan ini mendukung strategi laboratorium berlapis dibandingkan penerapan metode tunggal secara eksklusif. Model operasional yang direkomendasikan menggabungkan penyaringan cepat dengan pengujian referensi konfirmasi dan pengetikan yang ditargetkan.
| Prioritas | Rekomendasi | Pembenaran |
|---|---|---|
| tinggi | Gunakan VIDAS sebagai alat skrining utama untuk sampel bervolume tinggi | Perputaran terpendek, alur kerja paling sederhana, Pengakuan FDA |
| tinggi | Konfirmasikan semua hasil positif VIDAS oleh SN 0170-92 atau API 20E | AOAC melaporkan positif palsu; konfirmasi konvensional diperlukan |
| SEDANG | Gunakan API 20E ketika identifikasi tingkat serotipe diperlukan | Pengetikan langsung dengan %ID 99.5 dan nilai-T 1 |
| SEDANG | Pertahankan SN 0170-92 sebagai metode referensi penyelesaian sengketa | Dasar yang diterima secara internasional untuk Salmonella Identifikasi |
| rendah | Dokumentasikan alasan pemilihan metode dalam manual mutu laboratorium | Mendukung audit akreditasi dan transparansi klien |
| rendah | Lacak tingkat positif palsu VIDAS sebagai indikator kualitas rutin | Memungkinkan pemantauan kinerja berkelanjutan pada langkah penyaringan |
“`
